海藻糖6磷酸合成酶(TPS)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注?意: 正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
海藻糖是由兩個(gè)葡萄糖分子以α,α-1-1 糖苷鍵連接而成的一種非還原雙糖,廣泛存在于酵母菌、霉菌、食用菌、低等植物、昆蟲、無(wú)脊椎動(dòng)物和高等植物等多種有機(jī)體中。海藻糖的非還原性決定了它對(duì)酸、堿、高溫等的穩(wěn)定性。另外,它本身具有很強(qiáng)的吸水性,使它在生物體內(nèi)具有抗脫水作用,在逆境條件下可通過(guò)識(shí)別外界刺激、產(chǎn)生和傳遞信號(hào)、基因表達(dá)和代謝調(diào)節(jié)來(lái)保護(hù)植物免受環(huán)境的傷害。
植物體內(nèi)主要以葡萄糖為底物合成海藻糖,該反應(yīng)首先在海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate synthase,TPS)的作用下,催化尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)和 6-磷酸葡萄糖反應(yīng)生成中間產(chǎn)物6-磷酸海藻糖,再在海藻糖-6-磷酸磷酸酶 (trehalose6-phosphate phosphatase,TPP)的作用下去磷酸化,生成海藻糖。因此,測(cè)定TPS活性對(duì)于研究植物逆境具有重要意義。
測(cè)定原理:
TPS 催化 UDPG 與 G6P 生成海藻糖-6-磷酸,同時(shí)產(chǎn)生 UDP;UDP 在丙酮酸激酶與乳酸脫氫酶作用下,氧化 NADH 為 NAD+,NADH 的下降速率與 UDP 含量成正比,通過(guò) 340nm 吸光度下降速率反映 TPS 活性。
需自備的儀器和用品:
酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品測(cè)定的準(zhǔn)備:
1、細(xì)胞的處理:收集或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3S,間隔 10S,重復(fù) 30 次);8000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、組織的處理:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),冰浴中勻漿。8000g ,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
