產(chǎn)品中心
產(chǎn)品詳情

  • 產(chǎn)品名稱：2× Probe qPCR Master Mix(with ROX)

  • 產(chǎn)品型號(hào)： 5×1ml
  • 產(chǎn)品廠商：通蔚生物
  • 產(chǎn)品價(jià)格：276
  • 產(chǎn)品庫(kù)存：104
  • 產(chǎn)品文檔：
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簡(jiǎn)單介紹：
2× Probe qPCR Master Mix(with ROX)本產(chǎn)品為2×預(yù)混熒光定量PCR反應(yīng)體系，使用時(shí)只需加入模板、引物、ROX Reference Dye（用以校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差，根據(jù)不同熒光定量 PCR 儀選擇使用）和水，使其工作濃度為1×，即可進(jìn)行反應(yīng)。
詳情介紹：
產(chǎn)品特點(diǎn)
2 × Probe qPCR Master Mix 是專用于探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光定量PCR 的預(yù)混體系，包含熱啟動(dòng) DNA Polymerase、PCR 優(yōu)化的穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑、dNTPs 和Mg2+，操作簡(jiǎn)便，主要用于基因組 DNA 靶序列和 RNA 反轉(zhuǎn)錄后 cDNA 靶序列檢測(cè)，如基因表達(dá)分析，拷貝數(shù)分析，SNP 基因型分析等，適用于不同類型探針?lè)晒舛?。本產(chǎn)品為2×預(yù)混熒光定量PCR反應(yīng)體系，使用時(shí)只需加入模板、引物、ROX Reference Dye（用以校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差，根據(jù)不同熒光定量 PCR 儀選擇使用）和水，使其工作濃度為1×，即可進(jìn)行反應(yīng)。

它具有下列特點(diǎn)：
1. 高靈敏度：可以精-確定量低拷貝模板；
2. 高特異性：大限度的減少引物二聚體和非特異性產(chǎn)物；
3. 有效性：擴(kuò)增效率高，CT 值更低。

成份規(guī)格

產(chǎn)品組成

規(guī)格

2×Probe qPCR Master Mix

1ml / 5×1ml

50 × ROX Reference Dye I

40μl / 200μl

50 × ROX Reference Dye II

40μl / 200μl

-20℃保存一年

本產(chǎn)品僅供科研使用　，不得用于其它用途


使用方法
（注 意：以下舉例為常規(guī)qPCR體系和反應(yīng)條件，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化）
1.根據(jù)以下表格配置反應(yīng)體系，總體積為20 μl

試劑

用量

終濃度

2×Probe qPCR Master Mix

10μl

1×

正義引物 (10μM)

0.5μl

0.25μM

反義引物 (10μM)

0.5μl

0.25μM

模板 DNA

xμl

/

探針(10μM)

0.5μl

0.25μM

ddH2O

Up to 20μl

/

50× ROX Reference Dye I or II

0.4μl

1×


注 意：
1）通常引物濃度以 0.25 μM 可以得到較好結(jié)果，可以在 0.1 ~ 1.0 μM 作為設(shè)定范圍的參考。
2）使用的探針濃度，與使用的熒光定量 PCR 儀、探針?lè)N類、熒光標(biāo)記物質(zhì)種類有關(guān)，實(shí)際使用時(shí)請(qǐng)參照儀器說(shuō)明書(shū)，或各熒光探針的具體使用要求進(jìn)行濃度的調(diào)節(jié)。
3）通常 DNA 模板的量以10-100 ng基因組 DNA或1-10 ng cDNA 為參照，因不同物種的模板中含有的目的基因拷貝數(shù)不同，可對(duì)模板進(jìn)行梯度稀釋，以確定佳的模板使用量。
需使用 ROX Reference Dye I 的機(jī)型：
ABI Prism5700、7000、7300、7700、7900、7900HT、7900HT Fast、Step-One、Step-One Plus。
需使用 ROX Reference Dye II 的機(jī)型：
ABI Prism 7500/7500Fast、ViiA7, StratageneMX4000/MX3005P/MX3000P。
不需要使用 ROX 的機(jī)型：
Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4; Cepheid SmartCycler; Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s; Illumina Eco qPCR; Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene6000; Roche Applied Science LightCycler 480; Thermo Scientific PikoReal Cycler。
2. qPCR 反應(yīng)程序，兩步法 PCR：

過(guò)程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

95℃

5min

35－40cycles

變性

95℃

15sec

 

退火／延伸

60℃

30sec

注 意：建議采用兩步法 PCR 反應(yīng)程序，若因使用 Tm 值較低的引物等原因，得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，可嘗試進(jìn)行三步法 PCR 擴(kuò)增，退火溫度請(qǐng)以 55℃ - 65℃的范圍作為設(shè)定參考）

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