產(chǎn)品詳情
簡單介紹：
DNA片段凝膠回收試劑盒本試劑盒適用于從瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段。含有目的片段的凝膠溶于溶膠液中，通過離心吸附柱時(shí) DNA 片段可特異地結(jié)合到吸附柱的硅膠膜上，通過清洗液的清洗可去除雜質(zhì)，在低鹽、高 pH 條件下洗脫，得到純度較高的DNA 片段。該試劑盒操作簡便，質(zhì)量穩(wěn)定，得率高，得到的 DNA 片段可用于酶切、連接、測序、PCR模板等后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
詳情介紹：
產(chǎn)品特點(diǎn)
本試劑盒適用于從瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段。含有目的片段的凝膠溶于溶膠液中，通過離心吸附柱時(shí) DNA 片段可特異地結(jié)合到吸附柱的硅膠膜上，通過清洗液的清洗可去除雜質(zhì)，在低鹽、高 pH 條件下洗脫，得到純度較高的DNA 片段。該試劑盒操作簡便，質(zhì)量穩(wěn)定，得率高，得到的 DNA 片段可用于酶切、連接、測序、PCR模板等后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
它具有下列特點(diǎn)：
它具有下列特點(diǎn)：
1. 快速：步驟少，操作簡便，整個(gè)操作僅需十幾分鐘；
2. 高效：每個(gè)離心吸附柱可吸附 10 ug 以上的 DNA 片段，回收效率在80%以上。
成分規(guī)格
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Buffer BL |
25ml |
50ml |
100ml |
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Buffer GS |
25ml |
50ml |
100ml |
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Buffer EB |
10ml |
10ml |
30ml |
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Buffer W2（concentrate） |
15ml |
30ml |
60ml |
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Spin Columnwith Collection Tubes |
50個(gè) |
100個(gè) |
200個(gè) |
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本試劑盒在室溫（15 - 25℃）、干燥條件下可穩(wěn)定保存 12 個(gè)月，更長時(shí)間的保存可置于 2 - 8℃。 |
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本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于其它用途 |
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使用方法
柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 400 μl 的平衡液 BL，12,000 rpm(-13,400×g) 離心 1 min，棄收集管中濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請使用當(dāng)天處理過的柱子）
1. 切膠。用干凈刀片將目的 DNA 條帶切下，盡量切除不含DNA 的凝膠。（注意：紫外線對 DNA 片段有損壞作用，切膠要迅速，避免長時(shí)間照射，同時(shí)做好眼睛及皮膚的防護(hù)）2. 稱重。將切下的含有目的 DNA條帶的凝膠切成小塊，放入1.5 ml塑料離心管中，稱重。
（注 意：先稱一個(gè)空的 1.5 ml 塑料離心管的重量，然后放入凝膠塊再稱一次，兩次重量相減得到凝膠的重量）
3. 溶膠。加入等體積溶膠液 Buffer GS，60℃水浴，每隔 2 - 3 min 上下振蕩，直到凝膠完全溶解。
（注 意：如凝膠重量為 100 mg，其體積可視為 100 ul，則加入 100 ul 溶膠液；如凝膠濃度大于2%，所用溶膠液體積加倍；對于回收<300 bp 的小片段可在凝膠完全溶解后再加入1/2 膠塊體積的異丙醇以提高回收率；膠塊完全溶解后將溶液溫度降至室溫再上柱，因?yàn)槲街谑覝貢r(shí)結(jié)合DNA的能力較強(qiáng)）
4. 吸附。待溶液冷卻后加入離心吸附柱中，室溫靜置 2 min，讓DNA 片段與吸附柱中的硅膠膜充分結(jié)合，然后 12,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中濾液。
（注 意：如總體積超過 750 ul 可分 2 次將溶液加入同一離心吸附柱中；為增加目的DNA片段的洗脫濃度，也可將多管溶膠液加入到同一離心吸附柱中）
5. 清洗。加入 600 ul 的清洗液 Buffer W2，12,000 rpm 離心1 min，棄收集管中廢液。（注 意：清洗液 Buffer W2 按要求加入乙醇，用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發(fā); 如后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求純度較高，可再清洗一次）
6. 干燥。將離心吸附柱于 12,000 rpm 離心 2 min，甩干殘留漂洗液。
（注 意：此步不能省略，否則殘留乙醇會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)）
7. 回收。將離心吸附柱置于一個(gè)新的 1.5 ml 塑料離心管中，在吸附柱中央加入20- 50μl洗脫液，室溫放置 2 min。12,000 rpm 離心 1 min 收集 DNA 片段。
（注 意：為增加回收效率，可將洗脫液在 60℃預(yù)熱，也可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置 2 min，再次離心收集。如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調(diào)整其pH 值在7.0 - 8.5 之間）
注意事項(xiàng)
1. 如溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)先將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫中放置一段時(shí)間，必要時(shí)可在37℃水浴溶解，用后及時(shí)將瓶蓋蓋緊。
2. 所有操作都應(yīng)在室溫進(jìn)行，操作過程中應(yīng)注意防護(hù)，不要將溶液濺到皮膚上，眼睛里。
3. 如下一步實(shí)驗(yàn)要求較高，則應(yīng)盡量使用 TAE 電泳緩沖液，電泳時(shí)使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。
4. 切膠時(shí)，紫外照射時(shí)間應(yīng)盡量短，以免對 DNA 造成損傷。
5. 如果回收率較低，可在膠充分溶解后檢測 pH 值，如 pH 值大于7.5，可向含有DNA的膠溶液中加 10 - 30 μl 3 M 醋酸鈉（pH5.0）將 pH 值調(diào)到 5 - 7 之間。
6. 回收<100bp及>10 kb 的DNA片段時(shí)應(yīng)加大溶膠液的體積，延長吸附和洗脫的時(shí)間。
7. 回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關(guān)，初始量越少、洗脫體積越少，回收率越低。
