果糖激酶(FRK)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注?意: 正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
蔗糖是大多數(shù)高等植物從源到庫(kù)運(yùn)輸?shù)闹饕问? 但進(jìn)入庫(kù)器官后被分解為果糖和葡萄糖, 果糖在進(jìn)入下一步代謝前必須由果糖激酶或己糖激酶進(jìn)行磷酸化,以幫助庫(kù)組織的建立和庫(kù)強(qiáng)的提高。果糖激酶是催化果糖磷酸化的主要酶,還可以作為植物的己糖感受器和信號(hào)分子, 通過影響植物的生長(zhǎng)周期來調(diào)控植物的代謝和進(jìn)程,在庫(kù)組織中發(fā)揮重要的作用。因此,研究果糖激酶對(duì)研究植物中果糖代謝調(diào)節(jié)機(jī)制具有十分重要的意義。
測(cè)定原理:
FRK 催化果糖合成 6-磷酸果糖,6-磷酸果糖在磷酸己糖異構(gòu)酶的作用下異構(gòu)為 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化 6-磷酸葡萄糖脫氫生成 NADH,NADH 在 340nm 有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品:
酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理:
1、培養(yǎng)細(xì)胞:先收集或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
